現(xiàn)有凍存方法存在的問題:
1、DMSO對(duì)細(xì)胞存在一定的毒性,用量受到限制,降低或者不使用DMSO,尋找其它替代物是最好的選擇。
2、血清,即使是純化得到的白蛋白,由于其動(dòng)物來源的特性,會(huì)極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能。而且,血清來源受限,價(jià)格昂貴,所以其使用也必然會(huì)受到越來越多的限制。因此,尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要。
3、目前,最成熟和最穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中,這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性,在需要的時(shí)候經(jīng)過復(fù)蘇程序,使得細(xì)胞重新生長(zhǎng)增殖以用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞儲(chǔ)存在-196℃液氮中,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無限的,但是液氮凍存步驟繁瑣,需要經(jīng)過程序降溫,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)(或隔夜),最后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個(gè)小時(shí),以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量的死亡。)
賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作,分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”(貨號(hào):CF0101) 和2020年研發(fā)了 “無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”(貨號(hào):CF0201;專利申請(qǐng)?zhí)枺?02010307890.6)。這兩款凍存液均是不含血清,含DMSO,非程序降溫、可-80℃長(zhǎng)期冷凍保存的通用型細(xì)胞凍存液 ,區(qū)別在于“Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”(貨號(hào):CF0101)的DMSO含量為10%, “無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”(貨號(hào):CF0201)DMSO的含量為5%,產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛。
鑒于某些類型的細(xì)胞對(duì)DMSO敏感,使用含DMSO的細(xì)胞凍存液可能會(huì)影響細(xì)胞的功能,賽爾瑞成繼續(xù)研究工作,開發(fā)出一款無血清、無DMSO、無毒性、非程序降溫、-80℃可長(zhǎng)期冷凍保存的凍存液體系:CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液(貨號(hào):CF0301)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
☆ 高安全性,不含血清及動(dòng)物源成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
☆ 無DMSO,對(duì)細(xì)胞無潛在的毒性作用。
☆ 細(xì)胞存活率高,無批次差異。
☆ 完全凍存液配方,可直接使用,方便簡(jiǎn)捷。
☆ 可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程(省時(shí)、省力、省錢),不需要采用程序降溫儀,更不需要放置在-196℃液氮。
☆ 可原位凍存,比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆,可以大規(guī)模減少工作量,避免污染。
CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液凍存效果:
圖1. 3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖 圖2. ATDC5細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖
3T3細(xì)胞存活率>90% ATDC5存活率>90%
圖3 小鼠脾臟T細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞凋亡圖 三個(gè)批次復(fù)蘇率均>95%,且批次間凍存效果無明顯差異
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
目錄價(jià)格 |
CF0301 |
CRD0 無血清無DMSO細(xì)胞凍存液 |
100 mL |
890 |
CF0302 |
CRD0 無血清無DMSO細(xì)胞凍存液 |
500 mL |
3890 |